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离心机分离技术要点总结
发布时间:2021-08-20浏览次数:19

从相关文献可知,离心机的离心分离方法仍以其分离范围广、容量大的优势存在,它可以研究天然生物大分子的流体力学特性;生物大分子的片段分离可以在电离介质中进行;对缓冲液的限制很小(由于电泳技术中电流的热效应限制了缓冲液的使用)等等。此外,离心法广泛应用于各种实验方法的预处理阶段。考虑到设备在各个研究部门的分布,离心分离在许多条件下被广泛使用。差速离心、速率区密度梯度离心和等密度离心作为有效的分离纯化方法,在生物大分子的研究中也发挥着重要作用。

 离心机分离要点:

  1) 防止污染:

  为了避免实验过程中生物大分子部分损伤引起的降解或变性,导致降解的原因有很多,比如实验过程中的外力;有些酶污染等等,但最常见的原因是酶的作用。

  在实验中,一些脱氢酶被污染到样品中,使生物大分子变性。

(2) 避免变性的其他注意事项:

  (i)转头在离心前预冷到接近离心温度(在冰箱中放置过夜,或在恒温箱中保温)。对于超速离心机,其制冷系统主要用于抵消转头在稀薄空气中高速运转(转头表面线速度从亚因速—>超因速)时气动力摩擦产生的热量。在真空中,只有辐射传热的情况下,高速运转的转头温度从室温(如夏天30~35℃)降到5℃时间很长(如1 小时左右)一般应预冷到接近离心温度(±2℃)以确保在离心的最初阶段(15 分钟以内)转头温度和样品温度一致。

  (ii)用固定角式或近垂直管转头或垂直管转头作梯度离心时必须利用离心机的慢加速(0~500rpm )、慢减速(500rpm~0)功能,以保证梯度方向的顺利转换。

  (iii)离心开始、离心结束都要小心地轻放和轻取离心管,避免大的震动。

  (iv)卸样过程应在无震动的实验台上进行,环境温度和离心温度相近,卸样方法应选择平稳、外力作用很小的方式,尽可能不用泵输送样品。

  3) 梯度离心也有其相关要点,这一块内容相对复杂,要参考很多文献资料,感兴趣得朋友可以自行去了解一下:

  (1)B.D.Hames "Choice of Conditions for Density Gradient Centrifugation"IRL press.oxford 1984

  (2)M.Dobrota,R.Hinton "Conditions for density gradient Separations" Oxford University press .1992

  (3)D.RickWood,B.D.hames "Centrifugation,Essential Data" Wiley press.1994

  (4)C.A.Price "Centrifngation in density gradients"Academic press.New York 1982

  (5)余兴明,"质粒DNA的超速离心分离""生命的化学"1994.1

  (6)余兴明"血清脂蛋白的离心分离""生命的化学"1997.3

  (7)余兴明"离心技术"设备与方法概论上海生物物理学会1986,1993年)。

  以上是关于离心机的简单说明。离心机虽然只是一个很小的分离设备,但它的功能和价值是很大的,所以有必要多了解离心机,才能发现它的功能和价值!



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